Calregulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400775

Panoramica

CALR codifica la calreticulina, uno chaperone multifunzionale del reticolo endoplasmatico (RE) e una proteina ad alta capacità di legame del Ca²⁺, che supporta il controllo qualità del ripiegamento proteico e l’omeostasi del calcio intracellulare. La calreticulina partecipa al ciclo calnexina/calreticulina, coordinando la maturazione delle glicoproteine e la loro ritenzione nel RE, e contribuisce alla segnalazione dello stress del RE e alla risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response). Al di fuori del RE, CALR influenza la presentazione dell’antigene attraverso l’assemblaggio dell’MHC di classe I, modula l’adesione e la migrazione cellulare tramite processi correlati alle integrine e interagisce con vie di segnalazione dipendenti dal Ca²⁺. Un’attività di CALR deregolata è stata collegata ad alterazioni della proteostasi e della segnalazione immunitaria in diversi contesti patologici, inclusa la biologia dei tumori ematologici e solidi, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulla funzione del RE e sulla regolazione dello stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Calregulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CALR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CALR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CALR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Calregulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CALR per lo studio della segnalazione di Calregulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CALR critici per la funzione di Calregulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CALR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Calregulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Calregulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CALR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Calregulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Calregulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CALR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CALR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.