CAF-1 p150 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402472-ACT

CHAF1Aは、複製と共役したヌクレオソーム形成の過程で、新たに合成されたDNA上にヒストンH3–H4を装填するクロマチンアセンブリー因子1（CAF-1）複合体の最大サブユニットであるCAF-1 p150をコードする。DNA複製とクロマチン修復（再構築）を協調させることで、CAF-1 p150はS期の進行、複製フォークの安定性、エピジェネティック状態の維持を支え、さらにPCNAやDNA修復因子との相互作用を介してゲノム完全性にも寄与する。CAF-1機能の破綻は、複製ストレス、ヘテロクロマチン構造の変化、異常な転写プログラムと関連しており、これらの過程は増殖性疾患の生物学的文脈でしばしば研究されている。したがってCHAF1Aの活性は、DNA損傷応答、クロマチンダイナミクス、細胞周期制御を司る経路と関連が深い。

CAF-1 p150 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHAF1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CAF-1 p150 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHAF1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHAF1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CAF-1 p150の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHAF1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCAF-1 p150依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHAF1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCAF-1 p150経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。