C3 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-419391-ACT-2

マウス補体成分3（C3）遺伝子は補体系の中枢となるエフェクタータンパク質をコードしており、C3がタンパク質分解によりC3aおよびC3bへ活性化されることで、古典経路・レクチン経路・代替経路を介したオプソニン化、免疫複合体の除去、走化性の誘導、ならびに自然免疫応答の増幅が駆動される。C3bの沈着はC5コンバターゼ形成を支えるとともに補体受容体との相互作用を通じて貪食や抗原処理の様式を規定し、補体活性を炎症性シグナル伝達や凝固系、組織傷害プログラムとのクロストークへと結び付ける。C3活性化の制御異常は、感染感受性、自己免疫および免疫複合体介在性病態、神経炎症、代謝性炎症の各種モデルで関与が示されており、宿主防御と免疫病理に対するその広範な影響を反映している。マウスC3の遺伝子編集は、補体依存的エフェクター機能の機序解明、経路特異的な活性化の検討、さらに生体内および初代免疫細胞系における細胞種別の炎症への寄与と疾患関連表現型の解析を可能にする。

C3 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C3 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における C3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。