C23 (Nucleolin) Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421835

Descripción general

Ncl codifica C23 (nucleolina), una fosfoproteína nucleolar abundante que coordina la transcripción de rRNA, el procesamiento del pre‑rRNA y el ensamblaje de ribosomas, sosteniendo la proteostasis global y el crecimiento celular. La nucleolina también se desplaza entre el núcleo, el citoplasma y la superficie celular para influir en la organización de la cromatina, las respuestas al daño del ADN, la estabilidad del ARNm y las salidas de señalización vinculadas a la adaptación al estrés. Mediante interacciones con la maquinaria de la ARN polimerasa I, complejos ribonucleoproteicos y reguladores clave del ciclo celular, C23 integra la función nucleolar con las vías de proliferación y apoptosis. La desregulación de la expresión o la localización de la nucleolina se ha asociado con una biogénesis ribosomal alterada, programas de traducción aberrantes y fenotipos oncogénicos, por lo que es un foco frecuente en estudios de biología tumoral y estrés celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C23 (Nucleolin) (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ncl en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ncl junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ncl tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C23 (Nucleolin).

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ncl para la investigación de la señalización de C23 (Nucleolin), estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ncl críticos para la función de C23 (Nucleolin)
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ncl para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ncl. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C23 (Nucleolin) (m) y el plásmido HDR C23 (Nucleolin) (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ncl para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ncl definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.