C23 (Nucleolin) Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421835

Visão geral

Ncl codifica a C23 (nucleolina), uma fosfoproteína nucleolar abundante que coordena a transcrição de rRNA, o processamento do pré-rRNA e a montagem de ribossomos, sustentando a proteostase global e o crescimento celular. A nucleolina também transita entre o núcleo, o citoplasma e a superfície celular, influenciando a organização da cromatina, as respostas a danos no DNA, a estabilidade de mRNAs e saídas de sinalização ligadas à adaptação ao estresse. Por meio de interações com a maquinaria da RNA polimerase I, complexos ribonucleoproteicos e reguladores-chave do ciclo celular, a C23 integra a função nucleolar às vias de proliferação e apoptose. A expressão ou a localização desregulada da nucleolina tem sido associada a alterações na biogênese de ribossomos, programas de tradução aberrantes e fenótipos oncogênicos, tornando-a um alvo frequente em estudos de biologia tumoral e estresse celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO C23 (Nucleolin) (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ncl em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ncl, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ncl na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína C23 (Nucleolin).

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ncl para a investigação da sinalização de C23 (Nucleolin), estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ncl críticos para a função C23 (Nucleolin)
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ncl para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo C23 (Nucleolin) Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo C23 (Nucleolin) Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ncl. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo C23 (Nucleolin) Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR C23 (Nucleolin) (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ncl para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ncl definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.