Plasmide CRISPR d'Activation (h) C23 (Nucleolin): sc-400191-ACT

NCL code pour C23 (nucléoline), une phosphoprotéine nucléolaire abondante qui coordonne la biogenèse des ribosomes via la transcription de l’ADNr, la maturation du pré‑ARNr et l’assemblage des sous-unités ribosomiques. Au-delà du nucléole, la nucléoline régule l’organisation de la chromatine, les réponses aux dommages de l’ADN, la stabilité des ARNm et le transport nucléocytoplasmique, ce qui la relie à la progression du cycle cellulaire et à l’adaptation au stress cellulaire. Elle participe aussi, dans certains contextes, à la signalisation et au trafic à la surface cellulaire, en influençant la dynamique des complexes ARN–protéines et le contrôle de la traduction. Une expression ou une localisation dérégulée de la nucléoline est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs, à l’instabilité génomique et à une altération du métabolisme de l’ARN, ce qui la rend pertinente pour les études en biologie du cancer et sur les voies de stress impliquées dans les maladies neurodégénératives.

C23 (Nucleolin) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NCL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C23 (Nucleolin) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NCL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NCL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C23 (Nucleolin). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NCL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C23 (Nucleolin) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C23 (Nucleolin) dans les cellules tumorales présentant une expression de NCL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.