C23 (Nucleolin) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400191-ACT

O NCL codifica a C23 (nucleolina), uma fosfoproteína nucleolar abundante que coordena a biogênese de ribossomos por meio da transcrição de rDNA, do processamento do pré-rRNA e da montagem das subunidades ribossomais. Para além do nucléolo, a nucleolina regula a organização da cromatina, as respostas a danos no DNA, a estabilidade de mRNAs e o transporte nucleocitoplasmático, ligando-a à progressão do ciclo celular e à adaptação ao estresse celular. Em alguns contextos, também participa de sinalização e tráfego na superfície celular, influenciando a dinâmica de complexos RNA–proteína e o controle da tradução. A expressão ou a localização desreguladas da nucleolina estão frequentemente associadas a fenótipos proliferativos, instabilidade genômica e metabolismo de RNA alterado, tornando-a relevante para estudos de biologia do câncer e de vias de estresse em neurodegeneração.

C23 (Nucleolin) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NCL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C23 (Nucleolin) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NCL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NCL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C23 (Nucleolin). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NCL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C23 (Nucleolin) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C23 (Nucleolin) em células tumorais com expressão de NCL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.