C1orf115 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413237-ACT

C1orf115 (humano) codifica uma proteína pouco caracterizada, com anotação funcional limitada, o que sugere papéis possivelmente dependentes do contexto e mais bem esclarecidos por meio de estudos de perturbação. Conjuntos de dados disponíveis de transcritos e proteômica indicam padrões de expressão específicos por tipo celular, sustentando a investigação em diferenciação de linhagens, programas adaptativos ao estresse ou outros estados celulares regulados. Como as ligações mecanísticas com vias canônicas de sinalização permanecem incompletamente definidas, a modulação da expressão de C1orf115 é útil para mapear respostas transcricionais a jusante e redes de interação proteica. Assinaturas de expressão alteradas de ORFs (quadros de leitura abertos) não caracterizados, como C1orf115, são frequentemente analisadas em conjuntos de dados de câncer e neurobiologia, tornando-o relevante para estudos exploratórios de vias associadas a doenças, sem pressupor causalidade.

C1orf115 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1orf115 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1orf115 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1orf115 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1orf115, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1orf115. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1orf115 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1orf115 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1orf115 em células tumorais com expressão de C1orf115 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.