C15orf39 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412724-ACT

C15orf39 codifica uma proteína humana pouco caracterizada e com anotação funcional limitada, mas as evidências disponíveis sustentam um papel em processos fundamentais de homeostase celular, como a regulação da expressão gênica e a renovação/degradação de proteínas. Observações transcriptômicas e proteômicas sugerem que a C15orf39 pode participar de vias que influenciam a progressão do ciclo celular, respostas ao estresse e adaptação mitocondrial ou metabólica, dependendo do contexto celular. Alterações na expressão de C15orf39 foram relatadas em alguns conjuntos de dados associados a doenças, indicando possível relevância para programas desregulados de proliferação e manutenção do genoma. Como resultado, a superexpressão controlada de C15orf39 é útil para investigar redes transcricionais a jusante e dependências de vias em modelos de células humanas.

C15orf39 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C15orf39 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C15orf39 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C15orf39 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C15orf39, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C15orf39. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C15orf39 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C15orf39 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C15orf39 em células tumorais com expressão de C15orf39 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.