c-Myb Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400752-ACT

MYB codifica il fattore di trascrizione c-Myb, un regolatore del legame al DNA specifico per sequenza che controlla programmi responsabili di proliferazione, impegno di linea e differenziazione, in particolare nei compartimenti delle cellule ematopoietiche e immunitarie. c-Myb integra segnali provenienti da reti trascrizionali indotte da citochine e dallo sviluppo per modulare la progressione del ciclo cellulare, la sopravvivenza e la maturazione attraverso la regolazione coordinata di geni bersaglio a valle. Un’attività di MYB deregolata è stata associata a stati di differenziamento alterati e a un mantenimento del segnale proliferativo in diversi contesti rilevanti per le neoplasie, incluse leucemie e linfomi, ed è inoltre implicata nel rimodellamento trascrizionale in alcuni tumori solidi selezionati. Queste proprietà rendono MYB un nodo chiave per analizzare i circuiti di regolazione genica, la trascrizione dipendente dalla cromatina e le decisioni di destino cellulare specifiche del contesto.

c-Myb Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

c-Myb Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di c-Myb. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da c-Myb nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via c-Myb nelle cellule tumorali con espressione di MYB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.