Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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c-Mpl Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403035
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- c-Mpl O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico c-Mpl, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:c-Mpl Anticorpo (E-7): sc-377417
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
c-Mpl Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403035 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O MPL codifica o recetor de trombopoietina c-Mpl, um recetor de citocinas do tipo I expresso predominantemente em células estaminais/progenitoras hematopoiéticas e na linhagem megacariocítica, onde regula a autorrenovação, a sobrevivência e a produção de plaquetas. A ligação do ligando ativa sinalização dependente de JAK2, com as vias STAT, PI3K/AKT e MAPK/ERK a jusante, que coordenam programas de proliferação e diferenciação no nicho da medula óssea. A sinalização desregulada de MPL e a alteração da função do recetor estão associadas a megacariopoiese anómala e à biologia de doenças mieloides, incluindo fenótipos ligados a uma responsividade aberrante a citocinas e à homeostase de células estaminais. Como recetor restrito a uma linhagem e com saídas de via bem definidas, o c-Mpl constitui um alvo acessível para dissecar a sinalização por citocinas, as decisões de destino hematopoiético e o controlo de retroalimentação mediado por recetores.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO c-Mpl (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MPL em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MPL, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MPL na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína c-Mpl.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MPL para a investigação da sinalização de c-Mpl, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MPL críticos para a função c-Mpl
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MPL para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo c-Mpl Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo c-Mpl Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MPL. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo c-Mpl Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR c-Mpl (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MPL para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MPL definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.