c-Jun Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400077-ACT

O gene humano **JUN** codifica a c-Jun, um componente central do complexo de fator de transcrição **AP-1**, que integra sinais extracelulares em programas de expressão gênica que controlam proliferação, diferenciação, apoptose e respostas ao estresse celular. A atividade de c-Jun é regulada por fosforilação a jusante da sinalização **MAPK/JNK**, conectando estímulos inflamatórios, estresse oxidativo e vias de fatores de crescimento à cromatina e à reprogramação transcricional. Por meio da cooperação com outros membros da família AP-1 e com redes transcricionais mais amplas, o **JUN** influencia processos como a transição epitélio–mesênquima, a regulação imune e a adaptação metabólica. A desregulação da sinalização **JUN/AP-1** é frequentemente associada à transformação oncogênica, a fenótipos invasivos e à resistência ao estresse celular em múltiplos contextos de doença, reforçando seu valor como um nó mecanístico em pesquisas focadas em vias.

c-Jun O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JUN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Jun O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JUN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JUN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Jun. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JUN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Jun no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Jun em células tumorais com expressão de JUN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.