c-Fms/CSF-1R Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419839-ACT

Csf1r codifica per il recettore tirosin-chinasico c-Fms/CSF-1R, un regolatore chiave dell’impegno di linea monocyte–macrofago, della sopravvivenza e della polarizzazione funzionale nel topo. In seguito al legame con CSF-1 o IL-34, CSF-1R attiva a valle le vie di segnalazione PI3K–AKT, MAPK/ERK e JAK/STAT per coordinare proliferazione, chemiotassi e programmi genici infiammatori. L’attività di CSF-1R modella l’omeostasi dei macrofagi residenti nei tessuti e la differenziazione degli osteoclasti, influenzando il rimodellamento osseo e i processi di sviluppo. La deregolazione della segnalazione di Csf1r e della biologia dei macrofagi è ampiamente implicata nella neuroinfiammazione, nella funzione delle cellule mieloidi associate al tumore e in modelli di malattie infiammatorie croniche.

c-Fms/CSF-1R Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Csf1r senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

c-Fms/CSF-1R Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Csf1r nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Csf1r, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di c-Fms/CSF-1R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Csf1r nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da c-Fms/CSF-1R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via c-Fms/CSF-1R nelle cellule tumorali con espressione di Csf1r silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.