C/EBP ε Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402310-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- C/EBP εO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase C/EBP ε (h) e o Plasmídeo Double Nickase C/EBP ε (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CEBPE. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:C/EBP ε Anticorpo (C-10): sc-515192
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
C/EBP ε Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402310-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C/EBP ε Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402310-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CEBPE codifica o C/EBPε, um fator de transcrição bZIP com expressão restrita à linhagem, que coordena as etapas tardias da granulopoiese ao regular programas gênicos necessários para a diferenciação de neutrófilos, a biogênese de grânulos e a maturação terminal. Por meio da ligação a CCAAT/elementos potenciadores em promotores e enhancers, o C/EBPε se integra a redes transcricionais mieloides que envolvem membros da família C/EBP, PU.1 e sinalização responsiva ao G-CSF, impulsionando a expressão de genes efetores antimicrobianos e de saída do ciclo celular. A desregulação da transcrição dependente de CEBPE está associada a prejuízo no desenvolvimento de neutrófilos e a defeitos funcionais na imunidade inata, o que o torna relevante para o estudo de checkpoints de diferenciação mieloide e de vias efetoras de neutrófilos. Em biologia do câncer e pesquisa em hematopoiese, alterações na atividade de CEBPE também são usadas como marcador do estado de maturação mieloide e de desregulação transcricional em contextos leucêmicos.
C/EBP ε O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CEBPE em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CEBPE. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CEBPE. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CEBPE interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.