Particules Lentivirales d'Activation (m) C/EBP beta: sc-419623-LAC

Cebpb chez la souris code C/EBP bêta, un facteur de transcription bZIP qui coordonne des programmes d’expression génique inductibles dans les cellules immunitaires et stromales. C/EBP bêta intègre des signaux issus de voies inflammatoires et de réponse au stress, notamment TLR/NF-κB, MAPK/ERK et JAK/STAT, afin de réguler la production de cytokines, les réponses de phase aiguë et la différenciation myéloïde. Il contribue également à l’adipogenèse et à la régulation de gènes du métabolisme via sa coopération avec PPARγ et d’autres facteurs déterminant la lignée, influençant ainsi le destin cellulaire et le remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de C/EBP bêta a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une inflammation aberrante, à des décisions de lignée hématopoïétique altérées et à des états transcriptionnels liés au cancer.

Les particules d'activation lentivirales C/EBP beta (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cebpb dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales C/EBP beta (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cebpb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de C/EBP beta. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cebpb ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.