C/EBP beta Double Nickaseプラスミド (h): sc-400125-NIC

CEBPB は、血液系細胞および間葉系細胞における系譜決定やストレス応答性遺伝子発現を制御する、塩基性ロイシンジッパー型転写因子である C/EBPβ をコードします。C/EBPβ は、JAK/STAT、MAPK、NF-κB などの経路の下流でサイトカインや増殖因子のシグナルを統合し、炎症、急性期反応、脂肪細胞分化、マクロファージ活性化に関連するプログラムを制御します。さらに C/EBPβ は、AP-1 や他の C/EBP ファミリー因子との協調も含む、状況依存的な転写ネットワークを介して、細胞周期や生存に関わる意思決定も調整します。CEBPB 活性の破綻は、複数のがん関連モデルにおいて、異常な炎症シグナル、分化状態の変化、腫瘍促進的な転写表現型と関連づけられています。

C/EBP beta ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CEBPB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CEBPB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CEBPBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CEBPBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。