C/EBP beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419623-ACT

O gene murino **Cebpb** codifica o **C/EBP beta**, um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico que coordena programas gênicos que controlam a diferenciação mieloide, a adipogênese e as respostas de fase aguda de hepatócitos. Ele integra sinais a jusante de citocinas inflamatórias e fatores de crescimento para regular a progressão do ciclo celular, a sobrevivência e o remodelamento metabólico, com papéis de destaque na polarização de macrófagos e na transcrição responsiva ao estresse. A atividade do C/EBP beta se intersecta com vias como **NF-κB**, **MAPK/ERK**, **JAK/STAT** e **TGF-β**, moldando a acessibilidade da cromatina e o uso de enhancers em células com destino de linhagem já comprometido. A desregulação da expressão ou atividade de **Cebpb** tem sido associada a fenótipos inflamatórios, disfunção metabólica e estados transcricionais associados a tumores, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do crosstalk imune–metabólico e do controle transcricional.

C/EBP beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cebpb sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C/EBP beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cebpb em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cebpb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C/EBP beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cebpb nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C/EBP beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C/EBP beta em células tumorais com expressão de Cebpb silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.