BTF3a/b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403520-ACT

BTF3 codifica o fator basal de transcrição 3, que dá origem às isoformas BTF3a e BTF3b, as quais participam da iniciação da transcrição dependente da RNA polimerase II e da regulação mais ampla da expressão gênica. O BTF3 também atua como um fator associado a polipeptídeos nascentes, conectando programas transcricionais a processos cotraducionais que influenciam a proteostase e as respostas celulares ao estresse. Por meio dessas funções, o BTF3 afeta vias fundamentais que controlam a proliferação, a apoptose e a adaptação ao estresse proteotóxico. Alterações na expressão de BTF3 foram relatadas em diversos cânceres e em outros distúrbios caracterizados por desregulação da transcrição e da homeostase proteica, o que sustenta sua utilidade como um nó mecanístico para investigação de vias.

BTF3a/b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BTF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BTF3a/b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BTF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BTF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BTF3a/b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BTF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BTF3a/b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BTF3a/b em células tumorais com expressão de BTF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.