Plasmide CRISPR d'Activation (m) Brn-2/BRN2/POU3F2: sc-422351-ACT

Pou3f2 code pour le facteur de transcription à domaine POU Brn-2/BRN2/POU3F2, un régulateur clé de la spécification et de la maturation des lignées neurales chez la souris. BRN2 se lie à des motifs d’ADN de type octamère afin de coordonner des programmes géniques contrôlant la neurogenèse, la différenciation neuronale et le maintien de l’identité neurale, en s’intégrant à des réseaux transcriptionnels plus larges qui façonnent l’accessibilité de la chromatine et les transitions d’état cellulaire. Au cours du développement comme dans les tissus adultes, l’activité de Pou3f2 influence des lignées dérivées de la crête neurale ainsi que des lignées du système nerveux central, ce qui l’associe à des processus tels que la prolifération des progéniteurs, la migration et l’expression de gènes synaptiques. Des circuits transcriptionnels associés à BRN2, lorsqu’ils sont dérégulés, ont été étudiés dans des contextes incluant des phénotypes neurodéveloppementaux et la plasticité de lignée dans des modèles de cancer, ce qui étaye son utilisation comme nœud pour l’exploration de voies et de réseaux de gènes.

Brn-2/BRN2/POU3F2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pou3f2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Brn-2/BRN2/POU3F2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pou3f2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pou3f2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Brn-2/BRN2/POU3F2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pou3f2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Brn-2/BRN2/POU3F2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Brn-2/BRN2/POU3F2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pou3f2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.