Brn-2/BRN2/POU3F2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422351-ACT

Pou3f2 codifica o fator de transcrição com domínio POU Brn-2/BRN2/POU3F2, um regulador-chave da especificação e maturação da linhagem neural em camundongos. O BRN2 liga-se a motivos de DNA semelhantes ao octâmero para coordenar programas gênicos que controlam a neurogênese, a diferenciação neuronal e a manutenção da identidade neural, integrando-se a redes transcricionais mais amplas que moldam a acessibilidade da cromatina e as transições de estado celular. No desenvolvimento e em tecidos adultos, a atividade de Pou3f2 influencia linhagens derivadas da crista neural e do sistema nervoso central, relacionando-se a processos como proliferação de progenitores, migração e expressão de genes sinápticos. Circuitos transcricionais associados ao BRN2 desregulados têm sido estudados em contextos que incluem fenótipos do neurodesenvolvimento e plasticidade de linhagem em modelos de câncer, sustentando seu uso como um nó para investigação de vias e redes gênicas.

Brn-2/BRN2/POU3F2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pou3f2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Brn-2/BRN2/POU3F2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pou3f2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pou3f2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Brn-2/BRN2/POU3F2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pou3f2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Brn-2/BRN2/POU3F2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Brn-2/BRN2/POU3F2 em células tumorais com expressão de Pou3f2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.