Brk CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401127-ACT

プロテイン・チロシンキナーゼ6（PTK6、別名Brk）は、受容体型ではないチロシンキナーゼであり、上皮のシグナル伝達、細胞骨格ダイナミクス、細胞移動の制御に関与するとされています。Brkは増殖因子やサイトカインによって駆動される経路を調節し、EGFR/HERファミリーのシグナル伝達や、その下流にあるMAPKおよびPI3K/AKTネットワークの構成要素と交差して、増殖・生存プログラムに影響を与えます。PTK6の活性や細胞内局在は、アダプタータンパク質や転写調節因子のリン酸化変化と関連付けられており、ストレスや分化シグナルに対する細胞応答を形成します。PTK6の発現異常は複数の腫瘍コンテキストで報告されていることから、がん化シグナル、浸潤表現型、経路のリワイヤリングの機構研究における有用な分子ノードとみなされています。

Brk CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTK6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Brk CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTK6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTK6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Brkの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTK6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBrk依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTK6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBrk経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。