BRDG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425307

概要

STAP1（BRDG1）は造血系および免疫系細胞系列で発現するアダプタータンパク質であり、細胞表面受容体の下流で起こる細胞内シグナル伝達を統合・調整する役割を担います。マウスモデルでは、BRDG1はB細胞受容体関連経路やチロシンキナーゼ依存性シグナル伝達と関連づけられており、免疫の活性化や分化を形作るリン酸化カスケードおよび転写出力に影響を与えることが示されています。モジュール型の結合ドメインを介した相互作用を通じて、BRDG1はシグナルの統合、タンパク質複合体の形成、ならびに下流の遺伝子発現プログラムに影響し得ます。アダプター駆動型シグナル伝達ネットワークの破綻は炎症性表現型や血液疾患の機序と関連するため、Stap1は免疫シグナル伝達の頑健性や経路再配線を研究するうえで有用な標的となります。

BRDG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStap1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Stap1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Stap1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BRDG1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BRDG1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Stap1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BRDG1の機能に不可欠なStap1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Stap1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BRDG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびBRDG1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Stap1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BRDG1 HDRプラスミド（m）および BRDG1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStap1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStap1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。