BRD4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400519-LAC

BRD4 (proteína 4 contendo bromodomínio) é um leitor de cromatina que se liga a histonas acetiladas por meio de seus bromodomínios e ajuda a coordenar a iniciação e o alongamento da transcrição via recrutamento de P-TEFb e regulação da liberação da pausa da RNA polimerase II. É um componente central do controle epigenético em enhancers e super-enhancers, integrando sinais em programas de expressão gênica que governam a progressão do ciclo celular, a inflamação e a diferenciação específica de linhagens. Redes transcricionais dependentes de BRD4 se cruzam com vias como a sinalização de NF-κB e programas conduzidos por MYC, tornando a BRD4 um nó central em estudos de dependência transcricional e estados de cromatina desregulados. Alterações na atividade de BRD4 e a remodelação de enhancers estão associadas a fenótipos proliferativos e inflamatórios, sustentando seu uso em pesquisas mecanísticas em biologia do câncer, imunologia e regulação gênica do desenvolvimento.

As Partículas de Ativação Lentivirais BRD4 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de BRD4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais BRD4 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição BRD4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de BRD4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo BRD4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.