BRCA1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400093-ACT

BRCA1 codifica uma proteína supressora tumoral que atua como coordenadora central da manutenção do genoma por meio da detecção de danos ao DNA, do reparo por recombinação homóloga e da proteção da forquilha de replicação. BRCA1 participa do controle de checkpoints e de complexos de reparo associados à cromatina, integrando a sinalização nas vias ATM/ATR para preservar a estabilidade genômica após quebras de dupla fita. Também contribui para a regulação transcricional e para processos mediados por ubiquitina que influenciam a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse. A atividade desregulada de BRCA1 está fortemente associada à capacidade reduzida de reparo do DNA e ao aumento da instabilidade genômica, tornando-a um alvo-chave para estudos mecanísticos em biologia do câncer e pesquisa em reparo do DNA.

BRCA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BRCA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BRCA1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BRCA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BRCA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BRCA1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BRCA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BRCA1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BRCA1 em células tumorais com expressão de BRCA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.