bradykinin B2 R Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419318-ACT

O gene Bdkrb2 de camundongo codifica o receptor B2 de bradicinina (bradykinin B2 R), um GPCR expresso de forma constitutiva que medeia respostas às cininas em tecidos vasculares e inflamatórios. Após a ligação do ligante, acopla-se principalmente a Gαq/11 e Gαi/o para ativar a PLCβ, elevar o Ca2+ intracelular, estimular a PKC e acionar as vias de óxido nítrico e prostaglandinas que regulam a vasodilatação, a permeabilidade vascular e o tônus do músculo liso. A sinalização dependente de Bdkrb2 interage com programas ligados a MAPK e NF-κB que moldam o recrutamento de leucócitos, a formação de edema e a sensibilização à dor. A atividade desregulada do receptor B2 é frequentemente estudada em modelos de homeostase cardiovascular, inflamação neurogênica e fisiologia renal, nos quais pode influenciar o remodelamento tecidual e a carga inflamatória.

bradykinin B2 R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bdkrb2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

bradykinin B2 R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bdkrb2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bdkrb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de bradykinin B2 R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bdkrb2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de bradykinin B2 R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via bradykinin B2 R em células tumorais com expressão de Bdkrb2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.