BMP-3 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-430986-LAC-2

Das murine Gen Bmp3 kodiert BMP-3, ein sezerniertes Mitglied der TGF-β-Superfamilie, das als extrazellulärer Regulator osteogener Signalwege und der Homöostase des Skelettgewebes fungiert. BMP-3 moduliert die Knochenbildung, indem es die Aktivität des BMP/TGF-β-Signalwegs beeinflusst, einschließlich der Wechselwirkungen mit SMAD-abhängigen transkriptionellen Programmen, die die Osteoblastendifferenzierung und Matrixablagerung steuern. Genetische und Expressionsstudien bringen eine veränderte BMP-3-Signalgebung mit Unterschieden in der Knochenmineraldichte und Phänotypen der Skelettentwicklung in Verbindung, was seine Relevanz für Modelle gestörter Ossifikation und des Knochenumbaus untermauert. Die Geneditierung von Bmp3 in Mausmodellen ermöglicht die mechanistische Untersuchung skelettaler Signalnetzwerke, linien-/zelltypspezifischer Effekte in mesenchymalen Vorläuferzellen sowie nachgeschalteter transkriptioneller und extrazellulärer Matrixantworten in entwicklungs- und krankheitsrelevanten Kontexten.

BMP-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Bmp3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BMP-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Bmp3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BMP-3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Bmp3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.