Plásmido Doble Nickase (h) BMAL1: sc-400808-NIC

ARNTL codifica BMAL1, un factor de transcripción central de la familia bHLH-PAS (hélice‑bucle‑hélice básico PAS) que forma heterodímeros con CLOCK/NPAS2 para impulsar la expresión génica circadiana a través de elementos E‑box. Este oscilador transcripcional coordina la temporización celular del metabolismo, la homeostasis redox, el control del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN, integrando señales en vías hepáticas, inmunitarias y neuronales. La actividad de BMAL1 influye en la regulación rítmica de la función mitocondrial, el metabolismo de lípidos y glucosa y los programas transcripcionales inflamatorios, lo que convierte a ARNTL en un nodo clave que vincula la alteración circadiana con fenotipos cardiometabólicos, trastornos neuroconductuales y la reprogramación transcripcional asociada a tumores. En consecuencia, ARNTL se estudia ampliamente en cronobiología y biología de sistemas para cartografiar redes controladas por el reloj y sus salidas funcionales aguas abajo.

BMAL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARNTL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARNTL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARNTL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARNTL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.