BMAL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400808-NIC

ARNTL codifica BMAL1, un fattore di trascrizione di base helix–loop–helix PAS fondamentale che forma un eterodimero con CLOCK/NPAS2 per guidare l’espressione genica circadiana attraverso elementi E-box. Questo oscillatore trascrizionale coordina la temporizzazione cellulare del metabolismo, dell’omeostasi redox, del controllo del ciclo cellulare e delle risposte al danno del DNA, integrando segnali tra vie epatiche, immunitarie e neuronali. L’attività di BMAL1 influenza la regolazione ritmica della funzione mitocondriale, del metabolismo dei lipidi e del glucosio e dei programmi trascrizionali infiammatori, rendendo ARNTL un nodo chiave che collega l’alterazione dei ritmi circadiani a fenotipi cardiometabolici, disturbi neurocomportamentali e riorganizzazioni trascrizionali associate ai tumori. Di conseguenza, ARNTL è ampiamente studiato in cronobiologia e biologia dei sistemi per mappare le reti controllate dall’orologio e i loro output funzionali a valle.

BMAL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARNTL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARNTL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARNTL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARNTL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.