BID Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400510-ACT

O BID humano codifica uma proteína da família BCL-2 do tipo “BH3-only” que conecta a sinalização extrínseca por receptores de morte à via intrínseca mitocondrial de apoptose. Após a clivagem pela caspase-8, gerando o BID truncado (tBID), ele promove a permeabilização da membrana externa da mitocôndria dependente de BAX/BAK, a liberação de citocromo c e a ativação subsequente de caspases, integrando assim sinais apoptóticos com respostas celulares ao estresse. A atividade do BID se cruza com a sinalização de p53, vias de sobrevivência reguladas por NF-κB e a dinâmica mitocondrial que molda decisões de destino celular. A expressão ou o processamento desregulados de BID têm sido associados a limiares apoptóticos alterados observados na biologia do câncer, na homeostase imune e em modelos de lesão tecidual, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos da regulação da morte celular.

BID O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BID sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BID O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BID em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BID, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BID. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BID nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BID no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BID em células tumorais com expressão de BID silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.