beta TubulinCRISPR激活质粒(h): sc-400044-ACT

人类 TUBB 基因编码 β-微管蛋白，它是微管的核心结构亚基，可与 α-微管蛋白聚合形成有丝分裂纺锤体，并维持细胞骨架结构。β-微管蛋白的动态变化通过微管的持续重塑，支持染色体分离、由驱动蛋白（kinesin）和动力蛋白（dynein）介导的细胞内运输、细胞极性以及纤毛相关过程。TUBB 的功能与细胞周期调控及微管依赖性信号通路相互交织，从而影响细胞增殖与迁移。微管蛋白表达或微管行为的改变与染色体不稳定性的研究密切相关，也与神经发育和神经退行性疾病机制，以及癌细胞生物学中由细胞骨架驱动的变化广泛相关。

beta Tubulin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TUBB的表达。

beta Tubulin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TUBB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TUBB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性beta Tubulin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TUBB位点，并能够研究内源性位点上依赖于beta Tubulin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TUBB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟beta Tubulin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。