beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β₂-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400291-ACT

ADRB2 codifica o receptor β2-adrenérgico (β2-AR), um receptor acoplado à proteína G que detecta catecolaminas e se acopla principalmente à Gs para estimular a adenilil ciclase, elevar o cAMP e ativar a sinalização dependente de PKA. Os efeitos a jusante incluem regulação da transcrição mediada por CREB, modulação do manuseio de cálcio e crosstalk com as vias MAPK/ERK e de β-arrestina, que moldam a dessensibilização do receptor, a internalização e a sinalização enviesada. Em células humanas, o ADRB2 influencia o tônus do músculo liso, o controle metabólico e a função de células imunes por meio de redes de sinalização dependentes do contexto. Alterações na expressão do β2-AR ou na dinâmica de sua sinalização foram associadas a traços complexos e a processos relevantes para doenças, incluindo hiper-reatividade das vias aéreas, respostas cardiovasculares ao estresse e sinalização adrenérgica associada a tumores no microambiente.

beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR em células tumorais com expressão de ADRB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.