Bcl-x_S/L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400170-ACT

BCL2L1 codifica as isoformas proteicas Bcl-xS/L, reguladores centrais da apoptose mitocondrial que modulam a permeabilização da membrana externa por meio de interações com membros da família BCL2, como BAX e BAK. O splicing alternativo gera a Bcl-xL antiapoptótica e a Bcl-xS pró-apoptótica, vinculando a BCL2L1 a decisões de destino celular durante o desenvolvimento, a homeostase imune e as respostas ao estresse celular. A atividade de BCL2L1 integra sinais de vias de fatores de crescimento e de estresse, influenciando a ativação de caspases, a integridade mitocondrial e a sobrevivência sob desafios genotóxicos ou metabólicos. A expressão desregulada de BCL2L1 e o equilíbrio entre isoformas são frequentemente estudados na sobrevivência de células cancerosas, em mecanismos de resistência a terapias e em modelos relevantes para neurodegeneração de vulnerabilidade apoptótica.

Bcl-xS/L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCL2L1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcl-xS/L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCL2L1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCL2L1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcl-xS/L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCL2L1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcl-xS/L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcl-xS/L em células tumorais com expressão de BCL2L1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.