Bcl-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-400265-ACT-2

O BCL6 humano codifica o represssor transcricional Bcl-6, uma proteína de dedos de zinco BTB/POZ que regula a diferenciação, a proliferação e a sobrevivência de células B do centro germinativo ao recrutar complexos correpressores (por exemplo, SMRT/NCoR, BCOR) para silenciar genes-alvo. O Bcl-6 integra sinais do receptor de células B e de vias de citocinas para modular programas que controlam respostas a danos no DNA, apoptose e checkpoints do ciclo celular, moldando assim a maturação da afinidade dos anticorpos. A expressão ou atividade desregulada de BCL6 está fortemente associada a neoplasias linfoides derivadas do centro germinativo e a alterações na regulação imune, tornando-o um nó-chave em estudos de redes transcricionais oncogênicas. A edição genética de BCL6 é amplamente utilizada para dissecar circuitos transcricionais, mapear dependências entre potenciadores e promotores e avaliar as consequências funcionais de variantes regulatórias em sistemas modelo de imunologia e câncer.

Bcl-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCL6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcl-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCL6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCL6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcl-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCL6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcl-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcl-6 em células tumorais com expressão de BCL6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.