BAT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403785

Descripción general

DDX39B codifica BAT1 (también conocida como UAP56), una helicasa de ARN de la familia DEAD-box conservada que favorece la remodelación dependiente de ATP de complejos ARN–proteína durante el empalme (splicing) del pre-ARNm y la exportación del ARNm. BAT1 actúa junto con la maquinaria de exportación TREX para acoplar la transcripción, la dinámica del espliceosoma y la exportación nuclear, moldeando así los programas de expresión génica y el control de calidad del ARN. A través de estas funciones, la actividad de DDX39B influye en la proliferación celular, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata vinculada al procesamiento del ARN. La regulación alterada de las helicasas de ARN y de la biogénesis de mRNP se asocia con frecuencia a estados transcripcionales oncogénicos y fenotipos inflamatorios, lo que convierte a BAT1 en una diana útil para estudios mecanísticos del metabolismo del ARN en modelos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BAT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDX39B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDX39B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDX39B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BAT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDX39B para la investigación de la señalización de BAT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDX39B críticos para la función de BAT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDX39B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BAT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BAT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDX39B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BAT1 (h) y el plásmido HDR BAT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDX39B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDX39B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.