band 3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401705-ACT

SLC4A1は、band 3（アニオン交換体1、AE1）をコードしている。band 3は赤血球膜に非常に豊富に存在する膜タンパク質で、電気的に中性なCl⁻/HCO₃⁻交換を触媒し、CO₂輸送、全身の酸塩基平衡、ならびに赤血球のイオン恒常性を支える。band 3は細胞骨格や解糖系酵素との相互作用を介して、膜の安定性、細胞形状の維持、そして形質膜上における多タンパク質複合体の組織化に寄与する。腎臓の介在細胞では、AE1が重炭酸の取り扱いとpH調節に関与しており、SLC4A1は主要な輸送および恒常性維持経路と結び付けられている。SLC4A1の遺伝学的・機能的な攪乱は、赤血球膜疾患や酸性化過程の異常と関連しており、赤血球生物学および上皮輸送における機構研究の観点から重要な標的となる。

band 3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC4A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

band 3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC4A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC4A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性band 3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC4A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるband 3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC4A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるband 3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。