BAF53 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403200-NIC

ACTL6A codifica a BAF53A, uma subunidade relacionada à actina do complexo de remodelamento de cromatina SWI/SNF (BAF) dependente de ATP, que modula o posicionamento de nucleossomos e a acessibilidade da cromatina. Por meio da regulação das paisagens de enhancers e promotores, a BAF53A contribui para o controle transcricional da progressão do ciclo celular, da especificação de linhagem e da manutenção de estados proliferativos, interagindo com vias como os programas transcricionais associados a MYC e E2F. Alterações na atividade de ACTL6A/BAF53A têm sido associadas ao controle epigenético desregulado em múltiplos contextos de câncer e à expressão gênica aberrante durante o desenvolvimento, tornando-o um ponto útil para estudar fenótipos impulsionados pela cromatina. A investigação funcional de ACTL6A sustenta pesquisas mecanísticas sobre dependências de remodelamento de cromatina, plasticidade transcricional e arquitetura regulatória em todo o genoma em células humanas.

BAF53 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ACTL6A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ACTL6A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ACTL6A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ACTL6A interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.