BACE Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423847-NIC

O gene Bace1 de camundongo codifica a enzima 1 clivadora da proteína precursora do amiloide no sítio β (BACE), uma protease aspártica que inicia o processamento amiloidogênico da APP ao gerar o fragmento C99, que posteriormente é clivado pela γ-secretase. A atividade da BACE se cruza com o tráfego endossomal e com a proteólise intramembranar regulada, e contribui para a proteostase e para a renovação de proteínas de membrana em neurônios e outros tipos celulares. Alterações na expressão ou na atividade de Bace1 têm sido associadas à produção de amiloide-β e à disfunção sináptica, tornando-o um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de vias relevantes para a neurodegeneração. A modulação experimental de Bace1 permite investigar a dinâmica do processamento da APP, a função endolisossomal e mudanças de sinalização a jusante em sistemas de modelos celulares e em camundongos.

BACE O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Bace1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Bace1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Bace1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Bace1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.