B7-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419575

概要

Cd86は共刺激性リガンドB7-2（CD86）をコードしており、樹状細胞、マクロファージ、B細胞などの抗原提示細胞に発現するI型膜貫通型糖タンパク質です。B7-2はT細胞上のCD28およびCTLA-4と結合し、活性化の閾値、サイトカイン産生、末梢免疫寛容を調節するとともに、TCRシグナル伝達、NF-κB/AP-1による転写プログラム、免疫チェックポイント制御と統合的に働きます。自然免疫による感知の過程で誘導的に発現することにより、炎症性シグナルを適応免疫のプライミングや胚中心反応へと結び付けます。CD86活性の破綻は、自己免疫、慢性炎症、移植応答、腫瘍の免疫回避のモデルに関与することが示されており、免疫学および免疫腫瘍学研究における重要な結節点となっています。

B7-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd86遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd86内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd86のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、B7-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、B7-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd86欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• B7-2の機能に不可欠なCd86エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd86ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• B7-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびB7-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd86遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  B7-2 HDRプラスミド（m）および B7-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd86ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd86標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。