Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421943
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- B23/Nucleophosmin Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im B23/Nucleophosmin-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: B23/Nucleophosmin: sc-271737
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421943 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Gen **Npm1** kodiert **B23/Nukleophosmin**, ein multifunktionales nukleoläres Phosphoprotein, das zwischen Nukleolus, Zellkern und Zytoplasma pendelt, um Ribosomenbiogenese, rRNA‑Prozessierung und die Architektur des Nukleolus zu koordinieren. Nukleophosmin ist über Interaktionen mit zentralen regulatorischen Netzwerken an Zellzykluskontrolle und Stressantworten beteiligt, darunter p53/ARF‑Signalwege, DNA‑Schadensantworten und chromatinassoziierte Prozesse. Seine Funktionen bei der Zentrosomenduplikation, der genomischen Stabilität und dem nukleozytoplasmatischen Transport verknüpfen **Npm1** mit der Kontrolle der Proliferation und der Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase. Eine fehlregulierte Aktivität und Lokalisation von Nukleophosmin ist in der Krebsbiologie und der hämatopoetischen Regulation umfassend untersucht worden, wodurch **Npm1** zu einem häufigen Ziel für mechanistische Studien zu onkogenem Stress und nukleolärer Dysfunktion geworden ist.
Das B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Npm1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Npm1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Npm1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die B23/Nucleophosmin-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Npm1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der B23/Nucleophosmin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Npm1-Exone abzielen, die für die B23/Nucleophosmin-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Npm1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom B23/Nucleophosmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Npm1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das B23/Nucleophosmin HDR-Plasmid (m) und B23/Nucleophosmin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Npm1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Npm1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.