B23/Nucleophosmin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421943

Visão geral

O gene Npm1 de camundongo codifica B23/nucleofosmina, uma fosfoproteína nucleolar multifuncional que transita entre o nucléolo, o núcleo e o citoplasma para coordenar a biogênese de ribossomos, o processamento de rRNA e a arquitetura nucleolar. A nucleofosmina participa do controle do ciclo celular e das respostas ao estresse por meio de interações com redes regulatórias-chave, incluindo a sinalização p53/ARF, as respostas a danos no DNA e processos associados à cromatina. Seus papéis na duplicação do centrossomo, na estabilidade genômica e no transporte núcleo-citoplasmático vinculam a função de Npm1 ao controle proliferativo e à manutenção da homeostase celular. A atividade e a localização desreguladas da nucleofosmina têm sido amplamente estudadas na biologia do câncer e na regulação hematopoética, tornando Npm1 um alvo comum para estudos mecanísticos de estresse oncogênico e disfunção nucleolar.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO B23/Nucleophosmin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Npm1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Npm1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Npm1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína B23/Nucleophosmin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Npm1 para a investigação da sinalização de B23/Nucleophosmin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Npm1 críticos para a função B23/Nucleophosmin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Npm1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo B23/Nucleophosmin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo B23/Nucleophosmin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Npm1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo B23/Nucleophosmin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR B23/Nucleophosmin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Npm1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Npm1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.