B-ATF Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-401553-LAC-2

O BATF humano codifica o B-ATF, um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico da rede AP-1 que forma heterodímeros com proteínas JUN e modula a ligação ao DNA em elementos semelhantes a AP-1 e em elementos compostos AICE/IRF, moldando programas de expressão gênica específicos do contexto. O BATF é um regulador central da diferenciação e da função efetora de células imunes, influenciando a especificação de linhagens de células T auxiliares e T foliculares auxiliares, respostas de centros germinativos e a sinalização induzida por citocinas a jusante de vias como a ativação do TCR e o controle transcricional dependente de IL-21/STAT. A atividade desregulada do BATF e os circuitos transcricionais associados têm sido ligados à inflamação mediada pelo sistema imune, autoimunidade e estados transcricionais oncogênicos em neoplasias hematológicas, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de regulação imune. A edição gênica de BATF dá suporte a aplicações de genômica funcional, incluindo a perturbação da cooperatividade AP-1/IRF, o mapeamento do uso de enhancers e do remodelamento da cromatina, e a dissecação de redes de sinalização imune em modelos de células humanas engenheiradas.

As Partículas de Ativação Lentivirais B-ATF (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de BATF numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais B-ATF (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição BATF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de B-ATF. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo BATF e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.