AT1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419048
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AT1a O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico AT1a, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AT1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419048 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Agtr1a codifica o receptor murino de angiotensina II tipo 1A (AT1a), um GPCR de sete domínios transmembrana que medeia a sinalização da angiotensina II em tecidos vasculares, renais, cardíacos e neurais. Após a ligação do ligante, o AT1a acopla-se principalmente a Gq/11 para ativar a fosfolipase C, elevar o Ca2+ intracelular e estimular a sinalização dependente de PKC, além de também ativar cascatas MAPK/ERK e vias associadas à β-arrestina que influenciam programas transcricionais. Esse receptor integra entradas do sistema renina–angiotensina com processos celulares que incluem regulação vasomotora, manuseio de sódio e fluidos, respostas ao estresse oxidativo e sinalização inflamatória. A atividade desregulada da via do AT1a é amplamente utilizada como eixo mecanístico em modelos de hipertensão, hipertrofia e remodelamento cardíacos, lesão renal e disfunção vascular, tornando o Agtr1a um alvo comum para dissecação de vias em biologia cardiovascular e renal.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AT1a (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Agtr1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Agtr1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Agtr1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AT1a.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Agtr1a para a investigação da sinalização de AT1a, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Agtr1a críticos para a função AT1a
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Agtr1a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo AT1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo AT1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Agtr1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo AT1a Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR AT1a (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Agtr1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Agtr1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.