AT_1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419048

概要

Agtr1aは、マウスのアンジオテンシンIIタイプ1A受容体（AT1a）をコードしており、血管、腎臓、心臓、神経組織におけるアンジオテンシンIIシグナル伝達を仲介する7回膜貫通型GPCRである。リガンド結合により、AT1aは主にGq/11と共役してホスホリパーゼCを活性化し、細胞内Ca2+濃度を上昇させ、PKC依存性シグナルを促進する。さらに、MAPK/ERKカスケードや、転写プログラムに影響を及ぼすβ-アレスチン連結経路も活性化する。この受容体はレニン・アンジオテンシン系からの入力を、血管運動調節、ナトリウム・体液の恒常性、酸化ストレス応答、炎症性シグナル伝達などの細胞過程と統合する。AT1a経路の活性が破綻すると、高血圧、心肥大およびリモデリング、腎障害、血管機能障害のモデルで機序的軸として広く用いられるため、Agtr1aは心血管・腎生物学における経路解析の一般的な標的となっている。

AT1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgtr1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agtr1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agtr1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AT1aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AT1aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agtr1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AT1aの機能に不可欠なAgtr1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agtr1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AT1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAT1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agtr1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AT1a HDRプラスミド（m）および AT1a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgtr1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgtr1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。