ATP6H CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411234-ACT

ATP6V0E1はATP6Hをコードしており、ATP6Hは液胞型H⁺-ATPase（V-ATPase）のV0ドメインを構成する中核成分で、エンドソーム、リソソーム、および分泌小胞の酸性化に必要なプロトン輸送を担う。オルガネラのpHを制御することで、V-ATPase活性は受容体介在性エンドサイトーシス、タンパク質の選別と分解、オートファジーフラックス、ならびにmTORやリソソーム依存性シグナル伝達に関連する膜輸送を調節する。V-ATPaseサブユニットの撹乱は小胞の恒常性を破綻させ、抗原プロセシング、神経伝達物質の充填、細胞代謝を変化させ得る。小胞の酸性化異常とリソソーム機能不全は、がん細胞の適応、神経変性様の表現型、免疫機能障害に関与するとされており、ATP6V0E1はエンドリソソーム経路を研究する上で有用な節点であることが示唆される。

ATP6V0E1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP6V0E1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATP6V0E1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP6V0E1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP6V0E1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATP6V0E1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP6V0E1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATP6V0E1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP6V0E1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATP6V0E1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。