Atg3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403308-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Atg3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Atg3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Atg3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATG3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Atg3 Anticorpo (A-3): sc-393660
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Atg3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403308-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atg3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403308-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG3 codifica a Atg3, uma enzima do tipo E2 essencial para a autofagia, que catalisa a conjugação de proteínas da família LC3/ATG8 à fosfatidiletanolamina, permitindo a expansão e a maturação da membrana do autofagossoma. Por meio do seu papel na cascata de conjugação do tipo ubiquitina ATG12–ATG5–ATG16L1, ATG3 sustenta o controlo de qualidade citoplasmático, a renovação de organelos e a adaptação ao stress por privação de nutrientes. A perturbação do fluxo autofágico dependente de ATG3 pode influenciar a proteostase, a homeostase mitocondrial e a sinalização imunitária inata, processos frequentemente implicados na neurodegeneração, na biologia das infeções e nas respostas ao stress em células cancerígenas. Assim, ATG3 é um alvo útil para estudar a autofagia seletiva, a degradação dependente de lisossomas e programas de sobrevivência celular sob stress metabólico ou proteotóxico.
Atg3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATG3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATG3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATG3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATG3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.