Atg2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429358

概要

Atg2b は、オートファジー関連タンパク質である Atg2B をコードしており、オートファゴソームの形成（生合成）と成熟に必須な保存性の高い因子です。Atg2B は膜接触部位における脂質の取り扱いに関与し、ファゴフォアの伸長と効率的なオートファジーフラックスを支えます。これらの過程は、栄養状態の感知とオルガネラの品質管理を統合するものです。Atg2B が関わるオートファジー経路が破綻すると、プロテオスタシス、ミトコンドリア恒常性、自然免疫シグナル伝達が乱れ、実験モデルにおいて神経変性、がん生物学、炎症性表現型に関連する機序と結び付くことがあります。そのためマウス系では、Atg2b は細胞ストレス適応や損傷した高分子の分解・更新における役割の観点から広く研究されています。

Atg2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAtg2b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Atg2b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Atg2bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Atg2Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Atg2Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Atg2b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Atg2Bの機能に不可欠なAtg2bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Atg2bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Atg2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAtg2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Atg2b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Atg2B HDRプラスミド（m）および Atg2B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAtg2bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAtg2b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。