Atg16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429488-ACT

O gene Atg16l1 de camundongo codifica a Atg16, um componente central do complexo ATG12–ATG5–ATG16L1, que coordena a biogênese de autofagossomos por meio da lipidização de LC3 e da expansão do fagóforo. Essa proteína conecta sinais upstream de nutrientes e de estresse à autofagia seletiva e à autofagia em massa, influenciando o controle de qualidade mitocondrial, respostas antimicrobianas e desfechos de sinalização inflamatória. Alterações na função de ATG16L1 estão associadas à biologia da barreira intestinal e à regulação da imunidade inata, o que a torna relevante para estudos de interações hospedeiro–microrganismo, fenótipos inflamatórios e adaptação ao estresse intrínseca à célula. Em sistemas experimentais, a perturbação de Atg16l1 pode modular o fluxo autofágico e vias de citocinas a jusante, apoiando a dissecação mecanística da homeostase dependente de autofagia.

Atg16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atg16l1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Atg16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atg16l1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atg16l1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Atg16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atg16l1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Atg16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Atg16 em células tumorais com expressão de Atg16l1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.