ATF4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400155-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ATF4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ATF4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase ATF4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATF4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ATF4 Anticorpo (B-3): sc-390063
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ATF4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O fator de transcrição ativador 4 (ATF4) é um fator de transcrição bZIP responsivo ao estresse que coordena programas adaptativos de expressão gênica durante a resposta integrada ao estresse (ISR). O ATF4 é traduzido preferencialmente após a fosforilação de eIF2α a jusante de PERK, GCN2, PKR e HRI, impulsionando redes transcricionais que regulam o metabolismo de aminoácidos, a homeostase redox, a autofagia e a apoptose por meio de alvos envolvidos na síntese de glutationa, no metabolismo de um carbono e na proteostase. Ele se integra à sinalização de estresse do RE e da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), incluindo cooperação com CHOP/DDIT3, para moldar decisões de destino celular sob estresse proteotóxico ou nutricional. A atividade desregulada de ATF4 tem sido implicada na sobrevivência de células cancerosas sob hipóxia e limitação de nutrientes, em neurodegeneração e distúrbios de proteostase, e em estados metabólicos e inflamatórios nos quais o controle transcricional adaptativo ao estresse está alterado.
ATF4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATF4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATF4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATF4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATF4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.