ATF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400155-KO-2
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ATF4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico ATF4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ATF4 Anticorpo (B-3): sc-390063
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ATF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) | sc-400155-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O fator de transcrição ativador 4 (ATF4) é um fator de transcrição bZIP central na resposta integrada ao estresse, na qual é preferencialmente traduzido após a fosforilação de eIF2α e coordena programas transcricionais adaptativos. O ATF4 regula o metabolismo de aminoácidos, a homeostase redox, a autofagia e a sinalização de estresse do retículo endoplasmático (RE), incluindo a comunicação cruzada com PERK–EIF2AK3, ATF3 e CHOP/DDIT3 para equilibrar desfechos de sobrevivência e apoptose. Por meio do controle da detecção de nutrientes e da proteostase, o ATF4 influencia a função mitocondrial e programas de diferenciação celular, e contribui para a reprogramação transcricional durante hipóxia e estresse oxidativo. A atividade desregulada de ATF4 tem sido implicada na adaptação ao estresse de células cancerosas, no estresse proteotóxico associado à neurodegeneração e em fenótipos de doenças metabólicas, tornando-o um nó-chave para estudos mecanísticos de redes gênicas responsivas ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ATF4 (h2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ATF4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ATF4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ATF4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ATF4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ATF4 para a investigação da sinalização de ATF4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ATF4 críticos para a função ATF4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ATF4 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo ATF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ATF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ATF4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo ATF4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ATF4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ATF4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ATF4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.