ATF3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416577-ACT

ATF3（activating transcription factor 3）は、ストレスによって誘導されるbZIP型転写因子であり、小胞体（ER）ストレス、DNA損傷、酸化ストレス、炎症性シグナル伝達など多様な刺激を統合して、状況依存的な転写プログラムへと落とし込みます。AP-1関連の遺伝子ネットワークを調節し、結合パートナーやクロマチン状態に応じて転写抑制因子または転写活性化因子として機能し、細胞周期制御、アポトーシス、代謝適応などの帰結を形作ります。ATF3の活性はMAPK、NF-κB、アンフォールドタンパク質応答（UPR）経路と交差し、急性ストレス応答を分化や免疫制御におけるより長期的な変化へと結び付けます。ATF3発現の異常は、炎症表現型の変化や腫瘍関連ストレスシグナルと関連付けられており、細胞状態の可塑性に関する機序研究における有用な結節点となります。

ATF3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATF3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATF3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATF3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATF3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。