ATAD5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405654-ACT

ヒトATAD5は、DNA複製および修復の過程でクロマチンからPCNAをアンロード（除去）することを促進し、ゲノム安定性を制御するAAA+ ATPアーゼをコードしています。この機能を通じてATAD5は、複製フォークの進行、複製後修復、ならびに複製ストレスの解消の協調に寄与し、S期にDNAの完全性を維持する経路群と交差します。ATAD5活性が攪乱されると、複製関連のDNA損傷や染色体不安定性が増加し得ます。これらはがん生物学や、DNA損傷応答の欠陥に関連するその他の疾患において頻繁に研究される過程です。そのためATAD5は、哺乳類細胞における複製連動修復やチェックポイントシグナル伝達を機構的に解析するための重要な切り口として広く利用されています。

ATAD5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATAD5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATAD5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATAD5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATAD5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATAD5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATAD5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATAD5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATAD5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATAD5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。