ASXL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401252-ACT

ヒトASXL1（additional sex combs like 1）はクロマチン関連の制御因子であり、ポリコームおよびトリソラックス群の機構と連携して、造血分化、幹細胞の自己複製、ならびに系譜決定を司る転写プログラムを形成する。ASXL1はヒストン修飾複合体との相互作用を介して遺伝子発現のエピジェネティック制御に関与し、クロマチンのアクセス性や発生シグナル伝達ネットワークに影響を与える。ASXL1機能の破綻は、骨髄系悪性腫瘍や関連する骨髄不全表現型で認められるエピゲノム状態の変化および転写制御異常と反復して関連づけられている。これらの特徴により、ASXL1はクロマチンリモデリング、転写制御、ならびに疾患関連の細胞状態遷移を研究するうえで有用な結節点となる。

ASXL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASXL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASXL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASXL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASXL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASXL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASXL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASXL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASXL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASXL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。