Asporin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426152-ACT

O gene **Aspn** de camundongo codifica a **asporina**, um pequeno proteoglicano secretado rico em leucina, enriquecido na matriz extracelular, onde modula a fibrilogênese do colágeno e a organização da matriz. A asporina regula a sinalização célula–matriz e influencia vias-chave como **TGF-β/SMAD** e a sinalização de **BMP**, afetando a condrogênese, a osteogênese e o remodelamento tecidual. Alterações na expressão de **ASPN** têm sido associadas a fenótipos do tecido conjuntivo e do esqueleto, incluindo degeneração da cartilagem relacionada à osteoartrite e contextos de remodelamento fibrótico. Essas propriedades tornam **Aspn** um gene útil para estudar a homeostase da matriz extracelular, a mecanotransdução e a regulação estromal do comportamento celular.

Asporin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Aspn sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Asporin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Aspn em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Aspn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Asporin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Aspn nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Asporin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Asporin em células tumorais com expressão de Aspn silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.