ASH2L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423846

Descripción general

Ash2l codifica ASH2L, un componente central de los complejos metiltransferasa de histona H3K4 SET1/MLL que regulan el estado de la cromatina y los programas de transcripción. Mediante el control de la metilación de H3K4, ASH2L contribuye a la expresión génica dependiente de la ARN polimerasa II, a la actividad de los potenciadores (enhancers) y al mantenimiento epigenético de la identidad celular durante el desarrollo y la diferenciación. La regulación de la cromatina dependiente de ASH2L se cruza con vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la especificación de linaje, lo que la hace relevante para estudios de biología de células madre y hematopoyesis. La desregulación de ASH2L o de la actividad de los complejos MLL/SET1 se ha implicado en estados transcripcionales oncogénicos y anomalías del desarrollo, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en modelos de enfermedad centrados en la epigenética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ASH2L (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ash2l en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ash2l junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ash2l tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ASH2L.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ash2l para la investigación de la señalización de ASH2L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ash2l críticos para la función de ASH2L
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ash2l para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ASH2L CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ASH2L CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ash2l. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ASH2L (m) y el plásmido HDR ASH2L (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ash2l para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ash2l definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.