ASCL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402039-ACT

ASCL1 (fator de transcrição 1 da família achaete-scute, bHLH) é um regulador humano do tipo hélice-alça-hélice básica que promove o comprometimento e a diferenciação da linhagem neuronal ao se ligar a motivos E-box e coordenar programas gênicos de neurogênese. Atua em redes transcricionais do desenvolvimento que integram a sinalização Notch, fatores proneurais e remodelamento de cromatina para controlar a saída do ciclo celular e a maturação de precursores neurais. A expressão desregulada de ASCL1 está associada à especificação aberrante de linhagem e a estados de diferenciação neuroendócrina na biologia do câncer, tornando-o uma ferramenta molecular útil para estudar a plasticidade transcricional. Além disso, o ASCL1 é amplamente utilizado como marcador e como indutor em modelos de reprogramação neuronal e de desenvolvimento neural.

ASCL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ASCL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASCL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ASCL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ASCL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASCL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ASCL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASCL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASCL1 em células tumorais com expressão de ASCL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.