Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Artemis Plasmide Double Nickase (h): sc-405295-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Artemis Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Artemis Double Nickase Plasmid (h) e il Artemis Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCLRE1C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Artemis Antibody (C-8): sc-518193
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Artemis Plasmide Double Nickase (h) | sc-405295-NIC | 20 µg | $410.00 |
DCLRE1C codifica Artemis, una nucleasi essenziale per l’elaborazione delle rotture a doppio filamento del DNA durante la ricombinazione V(D)J e la giunzione delle estremità non omologa classica (c-NHEJ). Artemis agisce insieme al complesso DNA-PK per aprire le estremità codificanti a forcina e per rifilare o risolvere termini di DNA complessi, supportando una riparazione accurata e la diversificazione dei recettori antigenici dei linfociti. L’alterazione dell’attività di Artemis compromette la stabilità genomica e ostacola lo sviluppo delle cellule immunitarie, collegando la disfunzione di DCLRE1C a radiosensibilità e a fenotipi di immunodeficienza combinata grave. In ambito di ricerca, Artemis viene comunemente studiata nel contesto delle risposte al danno al DNA, della scelta delle vie di giunzione delle estremità e dei meccanismi che regolano la ricombinazione programmata.
Artemis Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCLRE1C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCLRE1C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCLRE1C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCLRE1C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.